DOI: http://dx.doi.org/10.25063/21457735.162

GENOTIPIFICACIÓN Porphyromonas gingivalis- fimA: ESTANDARIZACIÓN DEL MÉTODO

Sandra Moreno, Beatriz Parra, Adolfo Contreras

Resumen


Objetivo. Optimizar la técnica de PCR convencional para la identificación de los diferentes genotipos del gen fimA de Porphyromonasgingivalis. Métodos. Se cultivaron las cepas de Porphyromonas gingivalis ATCC 33227, W83, y ATCC33279,  y aislados clínicos 486 y 723. Se realizó extracción de ADN y se realizó la PCR convencional, con diferentes condiciones de astringencia, (concentración de MgCl2), y diferentes grados de temperatura de alineación. La sensibilidad se calculó teniendo en cuenta el número de bacterias en diferentes diluciones. La especificidad de los primers utilizados fue calculada. Resultados. Los mejores resultados se obtuvieron con una concentración de 2 mM de MgCl2 y una temperatura de alineación de 60°C. En cuanto a la sensibilidad se encontró diferencias entre las muestras recuperadas del cultivo puro y las muestras inoculadas en fluido gingival crevicular, aumentando 10 veces el límite de detección. Se observó una alta especificidad entre los  primers y las secuencias de las cepas. Conclusión. En la prueba de PCR convencional, las condiciones óptimas son la concentración de 2 mM de MgCl2 y 60°C de temperatura de alineamiento, se puede inferir que los primers son secuencias específicas para la amplificación de los genotipos de fimA de P. gingivalis, cuando se toman muestras subgingivales es necesario una carga bacteriana mínima de 500 células para poderlos identificar.


Palabras clave


Reacción en cadena de la Polimerasa; Genotipificación; Porphyromonas gingivalis; fimbrias

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